|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
Интеллектуальная Система Тематического Исследования НАукометрических данных |
||
ИЗУЧЕНИЕ РОЛИ Т-КАДГЕРИНА В АНГИОГЕНЕЗЕ НА МОДЕЛЯХ IN VITRO И IN VIVOдипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Рубина К.А., Сысоева В.Ю.
- Автор: Юрлова Е.И.
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2008
- Аннотация: Т-кадгерин – уникальный представитель суперсемейства кадгеринов. Внеклеточный домен Т-кадгерина состоит из пяти кадгериновых повторов, очень сходных по структуре с классическими кадгеринами, но в отличие от классических кадгеринов, Т-кадгерин не имеет трансмембранного и цитоплазматического доменов и заякорен на плазматической мембране посредством гликозилфосфатидилинозитола (ГФИ) (Ranscht, Dours-Zimmermann, 1991). К настоящему времени установлена роль Т-кадгерина в регуляции роста нейронов в эмбриогенезе. Во время формирования задних конечностей куриного эмбриона прорастающие аксоны избегают тканей, где клетки экспрессируют Т-кадгерин. Таким образом, в клетках каудального склеротома и в формирующихся мышцах Т-кадгерин функционирует как молекула-навигатор, определяя путь прорастания аксонов и место формирования синаптического контакта (Fredette, Ranscht, 1994). Известно, что формирование нервной и сердечно-сосудистой систем в эмбриогенезе происходит параллельно, в результате чего крупные сосуды и нервы во многих случаях расположены в непосредственной близости друг от друга. Кроме того, многие белки, принимающие участие в развитии нервной системы, также участвуют и в развитии сердечно-сосудистой системы (Weinstein, 2005). Это позволяет предположить, что Т-кадгерин может служить регуляторной молекулой и во время роста сосудов (Rubina et al., 2005). Это предположение подтверждает тот факт, что высокий уровень экспрессии Т-кадгерина наблюдается в эндотелиальных клетках сердечно-сосудистых системы, гладкомышечных клетках сосудов, перицитах и кардиомиоцитах (Ivanov et al., 2001). Формирование новых кровеносных сосудов является фундаментальным процессом, происходящим как в эмбриогенезе, так и в постнатальном развитии. Во время эмбриогенеза кровеносные сосуды формируются за счёт васкулогенеза и ангиогенеза. В постнатальный период формирование новых кровеносных сосудов происходит при целом ряде патологий, в частности при развитии злокачественных опухолей (Folkman, 1971, Folkman, 1992, Folkman, 1995). Васкуляризация опухолей происходит за счёт васкулогенеза и ангиогенеза. Известно, что молекулы, ответственные за формирование новых сосудов во время эмбриогенеза, также контролируют и васкуляризацию опухолей. Поэтому основными целями данной работы было: исследовать влияние Т-кадгерина на рост, дифференцировку, миграцию клеток мышиной меланомы B16F10, а также на их способность экспрессировать факторы роста, стимулирующие ангиогенез, in vitro; исследовать роль Т-кадгерина в опухолевом ангиогенезе на модели хорио-аллантоидной мембраны куриного эмбриона и модели гематогенно метастазирующей в лёгкие меланомы у мышей in vivo. Основываясь на данных литературы, мы предположили, что Т-кадгерин может играть роль ингибитора опухолевого ангиогенеза, подавляя прорастание в опухоль новых кровеносных сосудов и, тем самым, препятствуя росту самой опухоли. Также данные литературы позволяют предполагать, что Т-кадгерин может являться супрессором опухолевого роста, непосредственно оказывая влияние на пролиферацию, дифференцировку и миграцию опухолевых клеток. В связи с этим в данной работе были поставлены следующие задачи: исследовать влияние гиперэкспрессии Т-кадгерина на митотическую активность клеток мышиной меланомы B16F10 и способность их к миграции, а также на степень пигментации культуры клеток B16F10 как показателя уровня дифференцировки in vitro; исследовать влияние гиперэкспрессии Т-кадгерина на способность клеток мышиной меланомы B16F10 формировать опухолевые массы на хорио-аллантоидной мембране куриного эмбриона и оценить размер и степень пигментации формирующихся опухолей; исследовать влияние гиперэкспрессии Т-кадгерина в клетках мышиной меланомы B16F10 на ангиогенез в зоне формирования опухолевых масс на модели хорио-аллантоидной мембраны куриного эмбриона и на модели гематогенно метастазирующей в лёгкие меланомы у мышей; оценить влияние гиперэкспрессии Т-кадгерина на уровень экспрессии клетками мышиной меланомы B16F10 основных ангиогенных факторов методом ПЦР с детекцией в режиме реального времени; исследовать пространственную и временную экспрессию Т-кадгерина во время эмбриогенеза куриного эмбриона методом in situ гибридизации. Выводы: 1) In vitro в культуре клеток мышиной меланомы В16F10, гиперэкспрессирующей Т-кадгерин, выявлено снижение способности клеток к миграции и достоверное снижение митотической активности, а также увеличение степени пигментации по сравнению с контрольными клетками; 2) Способность приживаться и формировать опухолевые массы на хорио-аллантоидной мембране куриного эмбриона у клеток меланомы В16F10, гиперэкспрессирующих Т-кадгерин, достоверно ниже, чем в контрольных клетках; 3) Клетки мышиной меланомы, гиперэкспрессирующие Т-кадгерин, на модели хорио-аллантоидной мембраны куриного эмбриона формируют пигментированные опухолевые массы площадью до 0,1 мм2, тогда как контрольные клетки формируют непигментированные или слабо пигментированные опухолевые массы площадью более 0,1 мм2; 4) Число сосудов, подрастающих к опухолевым массам, сформированным на хорио-аллантоидной мембране клетками, гиперэкспрессирующими Т-кадгерин, достоверно меньше, чем в контроле; 5) Число сосудов среднего диаметра в лёгочных метастазах, формирующихся при введении клеток меланомы B16F10, гиперэкспрессирующих Т-кадгерин, достоверно меньше, чем в контроле; 6) В Т-кадгерин-гиперэкспрессирующих клетках мышиной меланомы наблюдается достоверно повышенный уровень экспрессии TGFβ и bFGF, по сравнению с контрольными клетками; в то же время в Т-кадгерин-гиперэкспрессирующих клетках мышиной меланомы наблюдается достоверно пониженный уровень экспрессии CD34, по сравнению с контрольными клеткам; 7) На 13 стадии развития куриного эмбриона экспрессия Т-кадгерина была обнаружена в промежуточном, среднем и заднем мозге, преимущественно во внутреннем (прилежащем к невроцелю) слое нервной трубки, образующим эпендимную выстилку полостей головного мозга.
- Добавил в систему: Сысоева Вероника Юрьевна