| 1 |
1 октября 2020 г.-1 октября 2021 г. |
Изучение влияния растительных гормонов на секреторно-синтетическую активность культивируемых дермальных фибробластов человека. |
| Результаты этапа: В течение первого года выполнения проекта были получены следующие новые данные: 1) Анализ уровня секреции дермальными фибробластами основных компонентов внеклеточного матрикса – проколлагена I и фибронектина – с помощью ИФА показал, что АБК повышает секрецию проколлагена I и временно снижает секрецию фибронектина. ГК, напротив, снижает уровень секреции проколлагена I и стимулирует секрецию фибронектина. 2) Подсчёт количества миофибробластов – активированных фибробластов, характеризующееся повышенной секреторно-синтетической активностью - с помощью иммуноцитохимического выявления α-SMA показал, что АБК и ГК воздействуют на переход дермальных фибробластов в активированное состояние, причём АБК оказывает стимулирующее влияние, а ГК – подавляющее. 3) Анализ распределения проколлагена I и фибронектина в дермальных фибробластах и внеклеточном матриксе показал, что АБК и ГК не оказывают влияние на распределение проколлагена I и фибронектина и не вызывают нарушений в их синтезе и транспортировке. Таким образом, в этом году были получены новые данные, указывающие на то, что АБК и ГК оказывают разное влияние на секреторную активность дермальных фибробластов. |
| 2 |
1 октября 2021 г.-1 октября 2022 г. |
Изучение влияния растительных гормонов на секреторно-синтетическую активность культивируемых дермальных фибробластов человека. |
| Результаты этапа: В ходе выполнения проекта нами были получены следующие новые данные:
1) С помощью ИФА (иммуноферментного анализа) мы показали, что фитогормоны абсцизовая кислота (АБК) и гиббереллиновая кислота (ГК) при воздействии в течение 48 часов оказывают влияние на секреторную активность культивируемых дермальных фибробластов человека, причём АБК стимулирует секрецию проколлагена I, а ГК стимулирует секрецию фибронектина.
2) С помощью вестерн-блоттинга мы установили, что АБК и ГК по-разному влияют на синтетическую активность дермальных фибробластов: АБК вызывает повышение уровня синтеза проколлагена I и фибронектина, а ГК индуцирует снижение уровня синтеза проколлагена I.
3) Полуколичественный колориметрический анализ содержания коллагеновых и неколлагеновых белков во внеклеточном матриксе, формируемом дермальными фибробластами, показал, что при действии АБК содержание коллагеновых и неколлагеновых белков в матриксе повышается, а при действии ГК снижается, но статистически достоверно – только для коллагеновых белков.
4) Анализ уровня синтеза гладкомышечного актина α (α-SMA) – маркёра дифференцировки фибробластов в миофибробласты (клетки с повышенным по сравнению с фибробластами уровнем секреторно-синтетической активности), а также подсчёт количества миофибробластов в популяции фибробластов показали, что АБК стимулирует увеличение уровня синтеза α-SMA и количества миофибробластов в популяции дермальных фибробластов, а при действии ГК уровень синтеза α-SMA и количество миофибробластов уменьшается.
Таким образом, мы установили, что фитогормон АБК стимулирует дифференцировку дермальных фибробластов в миофибробласты, повышая их секреторно-синтетическую активность и увеличивая долю миофибробластов в клеточной популяции, что может быть использовано при разработке препаратов для ускорения заживления ран и лечения хронических ран при диабете, сосудистых заболеваниях и тяжёлых травмах. Фитогормон ГК, напротив, подавляет секреторно-синтетическую активность дермальных фибробластов и снижает долю миофибробластов в клеточной популяции, что может быть использовано при поиске способов предотвращения и лечения фиброза, и в частности образования рубцов. |
